血液肿瘤MRD检测lg/BCR基因重排检测(NGS法)

MRD检测送样量及灵敏度

样本类型

送样量

运输条件

 

样本类型

送样量

运输条件

灵敏度

提取/送样DNA(ug)

治疗前

骨髓(新鲜)

1mL

4℃，48h

治疗后

骨髓(新鲜)

2-3mL

4℃，48h

10-4

2ug

外周血(新鲜)

2-3mL

4℃，48h

外周血(新鲜)

>5ml

4℃，48h

10-5

7ug

DNA

2ug

干冰运输，48h

DNA

>7ug

干冰运输，48h

10-6

20ug

血液肿瘤MRD检测的方法学

在多数伴随热点致病突变的髓系血液肿瘤中，治疗监测过程常选择运用流式的微小残留及致病突变进行疗效检测;而针对淋系血液肿瘤的微小残留监测，据《儿童急性淋巴细胞白血病诊疗规范(2018年版)》推荐的MRD评估方法有流式细胞学、融合基因定量RT-PCR、IgH/TCR重排定量PCR和新一代测序(NGS)四种方法，其技术对比如下:

技术方法学

检测灵敏度

检测优劣

检测时效

流式细胞学

多色流式(MFC)

灵敏度10-4

应用快速、广泛;但因抗原漂移造成假阴性;

2d

二代流式(NGF)

灵敏度10-5

应用快速、广泛;能区分异常细胞与正常细胞的免疫表型偏差;不能识别疾病进程中的克隆演变

2d

定量PCR

融合基因定量RT-PCR

灵敏度10-4–5

适用于30-50%患者，需设计不同引物监测;不能识别疾病进程中的克隆演变

3d

IgH/TCR重排定量

灵敏度10-4–5

需设计特异性探针;不能识别疾病进程中的克隆演变和免疫重建

3-4d

NGS测序

基于Ig/TCR重排的NGS检测

灵敏度10-6

1.一次反应检测范围广:2.帮助识别癌细胞、同时识别克隆演变、免疫恢复和免疫重建;3.可使用新鲜或冰冻样本

2d

更多国内外指南也推荐高通量测序NGS作为血液肿瘤MRD的检测方法

Ig/BCR重排基因检测是一项用于研究B细胞受体（BCR）的基因检测。

    • 1.B细胞受体（BCR）是位于B细胞表面的跨膜蛋白。它由一个膜结合的免疫球蛋白分子和一个信号转导部分组成。这种蛋白通常位于这些淋巴细胞的外表面。BCR通过生化信号传导和从免疫突触中物理地获取抗原来控制B细胞的激活。B细胞通过与抗原结合，从而在细胞增殖和分化方面发挥作用，生成一群分泌抗体的浆细胞B细胞和记忆B细胞。

    • 2.BCR的结构：BCR的结构包括一个膜结合的抗体，就像所有抗体一样，它具有两个相同的抗原结合位点，这些位点是独特且随机确定的。BCR对抗原的识别是B细胞激活、存活和发育所必需的。当B细胞首次与其“同源抗原”结合时，它被激活，导致细胞增殖和分化，生成一群分泌抗体的浆细胞B细胞和记忆B细胞。

    • 3.BCR的功能：

1）信号传导：BCR通过改变受体寡聚化来进行信号传导。

2）内吞作用：BCR介导抗原的内吞，以便后续处理抗原并将肽段呈递给辅助T细胞。

BCR在免疫系统中起着关键作用，帮助我们对抗感染和疾病。

抗体基因座的胚系配置

Ig/BCR基因重排检测具有重要的临床意义和价值,主要体现在以下几个方面:

  1. 诊断价值:

    • 可用于诊断B细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤等B细胞肿瘤。这些肿瘤往往伴有Ig基因重排,检测可确定克隆性肿瘤细胞的存在。

    • 也可用于诊断某些T细胞淋巴瘤,因为部分T细胞肿瘤同样存在TCR基因重排。

  2. 疾病分型:

    • Ig/BCR基因重排模式与特定类型的淋巴瘤相关,有助于确定淋巴瘤的精确分型,从而指导治疗方案的选择。

  3. 最小残留病(MRD)监测:

    • 在治疗后,可检测患者体内是否残留有与初诊时相同的克隆性肿瘤细胞,为评估治疗效果和预测复发风险提供依据。

  4. 鉴别诊断:

    • 对于一些反应性增生性疾病,可与克隆性淋巴细胞增殖性疾病相鉴别。

  5. 确定肿瘤细胞的来源:

    • Ig/BCR基因重排模式可作为肿瘤细胞的”分子指纹”,在转移或复发时有助于确定肿瘤的来源。

Ig/BCR基因重排检测在淋巴瘤和多发性骨髓瘤的诊断、分型、疗效评估和预后判断等方面发挥着重要作用,是血液肿瘤诊治不可缺少的分子生物学检查手段。

微小残留病（MRD） 在血液肿瘤中具有重要的意义和价值。以下是关于MRD的一些重要信息：

1.MRD是预后的强有力指标：

    • 多项研究表明，达到无法检测到MRD的患者相对于MRD阳性的患者，其复发风险更低，生存状况更好。

    • MRD的检测能力已经大大提高，现在可以检测到1:104–1:106核细胞的癌细胞存在，而传统的细胞形态学只能检测到1:20的水平。

2.MRD的检测方法：

    • 多参数流式细胞术（MFC）：可以检测到10,000 – 100,000个核细胞中的1个癌细胞。它依赖于对肿瘤细胞与正常细胞上的抗原的检测。

    • 实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）：可以检测到100,000个核细胞中的1个癌细胞。广泛用于携带明确定义的遗传异常（如BCR-ABL1融合基因）的患者。

    • 新一代测序（NGS）：某些新型NGS方法可以检测到1百万核细胞中的1个癌细胞，与MFC和PCR技术高度一致。

    • ClonoSEQ® 是一种FDA批准的NGS方法，用于B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）、慢性淋巴细胞白血病（CLL）和多发性骨髓瘤（MM）的MRD分析。

3.不同血液肿瘤中的MRD应用：

    • 急性淋巴细胞白血病（ALL）：MRD评估是预测预后和指导治疗的标准临床实践。

    • 急性髓系白血病（AML）：MRD监测作为预后指标，用于识别即将复发的患者并进行移植后的强有力监测。

    • 多发性骨髓瘤（MM）：MRD用于在每个治疗阶段测量疗效深度，以指导预后。

    • 慢性髓性白血病（CML）：MRD分析用于评估治疗反应、预测预后，并识别可以停药的深度缓解患者。

MRD的检测对于血液肿瘤患者的治疗决策和预后评估至关重要。